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將液相的分析方法用于HPLC/MS(多級)聯用時需要考慮以下幾方面:1/分析目標化合物的離子化能力,2/流動相的混溶性,3/流速與柱子的匹配性等。
對于可以接受質子的堿性樣品,采用正離子化模式;反之對于易丟失質子的,有較多強負電性基團可嘗試使用負離子化模式。有些酸堿性并不明確的化合物則要進行預試方可確定。此時也可優先考慮選用APCl(+)進行測定,對于熱不穩定的化合物則優先考慮選用ESI。
對樣品的一般要求是:力求干凈,不含顯著量的雜質;不含高濃度的難揮發性酸(如硫酸,磷酸等)及其鹽,因這些酸及其鹽的侵入會引起很強的噪聲,嚴重時還會造成儀器噴口處放電;樣品粘度不能過大,以防堵塞柱子、噴口及毛細管入口。因此,樣品的制備或前處理在HPLC/MS(多級)分析中同樣是必要的。
HPLC/MS商品儀器的設計所達到的重現性和線性范圍指標均能滿足一般的定量分析精度要求。但由于其分析的樣品來源廣泛,本底復雜,因此HPLC/MS(多級)定量中要解決的主要問題是化學基質和生物學基質的干擾。
應用范圍:熱不穩定大分子化合物(如生物藥品,重組產物,醫藥學方面的藥物及體內藥物分析、藥物降解、藥物動力學、臨床醫學、中藥分析);生物化學領域的肽、蛋白質、寡核苷酸、糖等;環境化學分析方面(如有機污染物,土壤與水質分析);農藥獸藥殘留量分析;法醫學方面的濫用藥物、爆炸物和興奮劑檢測;合成化學方面的有機金屬化合物、有機合成物及表面活性劑、天然產物、復雜混合物分析等等。總之,只有無法離子化的樣品質譜才不能檢測。與GC/MS相比LC/MS靈敏度更高。
質譜儀從其最基本的功能上而言,主要是一種定性分析工具。采用LC與MS聯機的操作方式,可充分發揮液相色譜的分離功能和質譜儀的高靈敏度及高選擇性,來獲取一些混合物中單一組分的結構信息。選用混合編程掃描技術,進行多級質譜方式可同時檢測分子離子和若干碎片離子,進一步獲取相關化合物的結構信息。
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